ข้อมูลทางเทคนิค
คำแนะนำการใช้งานคอลัมน์/แผ่นสำหรับการแยกเกลือออกจากน้ำ c18
การแนะนำผลิตภัณฑ์
คอลัมน์/แผ่นสำหรับการแยกเกลือออกจากน้ำ C18 บรรจุด้วยเมทริกซ์ซิลิกาเจล C18 ซึ่งมีหมู่ฟังก์ชันคือ octadecyl ซึ่งมีคุณสมบัติไม่ชอบน้ำสูงและมีคุณสมบัติในการกักเก็บสารประกอบที่ไม่มีขั้วได้ดีเยี่ยม คอลัมน์/แผ่นสำหรับการแยกเกลือออกจากน้ำ C18 สามารถดูดซับโมเลกุลไพรเมอร์/โอลิโก/ดีเอ็นเอด้วย DMT โดยไม่กักเก็บเกลือ ทำให้ได้ผลิตภัณฑ์ไพรเมอร์/โอลิโก/ดีเอ็นเอที่มีความบริสุทธิ์สูง
คำแนะนำในการเลือก
BM Life Sciences นำเสนอคอลัมน์/แผ่นสำหรับการแยกเกลือ C18 ในหลากหลายขนาด และคุณสามารถเลือกคอลัมน์สำหรับการแยกเกลือที่เหมาะสมได้โดยพิจารณาจากความเข้มข้นของไพรเมอร์/โอลิโก สำหรับการประมวลผลแบบแบตช์ คุณสามารถเลือกแผ่นสำหรับการแยกเกลือ 96 หลุมได้
| หมายเลขสินค้า | บรรทัดฐาน | ข้อมูลจำเพาะโอลิโคนิวคลีโอไทด์ที่สามารถใช้ได้ | ขั้นตอนการอ้างอิง |
| SPEC18W150 | 50มก./1มล. | 10 นาโนโมล - 200 นาโนโมล | ขั้นตอนที่ 5 |
| SPEC18W3100 | 100มก./3มล. | 10 นาโนโมล - 600 นาโนโมล | ขั้นตอนที่ 1 |
| SPEC18W3300 | 300มก./3มล. | 10nmol - 2 .opmol | ขั้นตอนที่ 2 |
| SPEC18W61000 | 1ก/6มล. | 1 ไมโครโมล – 6 ไมโครโมล | ขั้นตอนที่ 3 |
| SPEC18W9630 | จาน 30 มก./96 หลุม | 5 นาโนโมล - 100 นาโนโมล | ขั้นตอนที่ 4 |
| SPEC18W9650 | จาน 50 มก./96 หลุม | 10 นาโนโมล - 200 นาโนโมล | ขั้นตอนที่ 4 |
| SPE15C18W9680 | จานเพาะเชื้อ 80 มก./96 หลุม (จานเพาะเชื้อ 96 หลุม 1.5 มล.) | 10 นาโนโมล - 500 นาโนโมล | ขั้นตอนที่ 5 |
| SPE23C18W9680 | เพลท 80 มก./96 หลุม (เพลท 96 หลุม 2.3 มล.) | 10 นาโนโมล - 500 นาโนโมล | ขั้นตอนที่ 5 |
บันทึก
คอลัมน์/เพลตทำความสะอาด C18 ยังสามารถกำจัดเกลือออกจากผลิตภัณฑ์ดิบและไพรเมอร์/โอลิโกหลังการทำให้บริสุทธิ์ด้วย HPLC และ PAGE ดูรายละเอียดในขั้นตอนที่ 5
สารเคมี
เกรดโครมาโตกราฟีอะซีโตไนไตรล์
0.1 M ชา, PH7.0
โซเดียมคลอไรด์ 0.5 โมลาร์
สารละลายล้าง (อะซีโตไนไตรล์ 5% ละลายใน Nacl 0.5 M)
กรดไตรฟลูออโรอะซิติก 3% (TFA)
น้ำดีไอออนไนซ์
อะซีโตไนไตรล์ 20%
บัฟเฟอร์ TE: 10 มิลลิโมลต่อลิตร ทริส-คลา, 1 มิลลิโมลต่อลิตร EDTA, PH 8.0
ขั้นตอนที่ 1
การเตรียมตัวอย่าง
เติม NacI 0.5 M ลงในตัวอย่างโอลิโคนิวคลีโอไทด์ในปริมาตร 2 มล.
การเปิดใช้งานคอลัมน์การแยกเกลือ
การกระตุ้น: ใช้อะซีโตไนไตรล์ 1 มิลลิลิตรเพื่อกระตุ้นคอลัมน์
การปรับสมดุล: คอลัมน์สมดุลด้วยสารละลาย TEAA 0.1 M ปริมาณ 1 มล. (PH7.0)
กระบวนการทำความสะอาด
1. ส่งสารละลายที่ประกอบด้วยโอลิโคนิวคลีโอไทด์ 2 มิลลิลิตรผ่านคอลัมน์การกำจัดเกลือ
2. ล้างคอลัมน์ 2 ครั้งด้วยสารละลายล้าง 1 มิลลิลิตร เพื่อกำจัดลำดับที่ไม่สำเร็จ
3. ล้างคอลัมน์ 2 ครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1 มล. เพื่อขจัดเกลือ
4. ล้างคอลัมน์ 2 ครั้งด้วยกรดไตรฟลูออโรอะซิติก 3% 1 มล. เพื่อกำจัด DMT และสังเกตว่าชั้นที่ดูดซับจะเปลี่ยนเป็นสีส้มแดง
5. ล้างคอลัมน์การกำจัดเกลือสองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1 มิลลิลิตร เพื่อกำจัดกรดไตรฟลูออโรอะซิติกและเกลือที่เหลือ
6. ชะเอซิโตไนไตรล์ 20% ออกมา 1 มล. แล้วประกอบเข้าด้วยกัน
ขั้นตอนที่ 2
การเตรียมตัวอย่าง
เติม NacI 0.5 M ลงในตัวอย่างโอลิโคนิวคลีโอไทด์ในปริมาตร 4 มล.
การเปิดใช้งานคอลัมน์การแยกเกลือ
การกระตุ้น: ใช้อะซีโตไนไตรล์ 2 มิลลิลิตรเพื่อกระตุ้นคอลัมน์
การปรับสมดุล: ปรับสมดุลคอลัมน์ 2 มล. ด้วย TEAA 0.1 M (PH 7.0)
กระบวนการทำความสะอาด
1. ส่งสารละลายที่ประกอบด้วยโอลิโคนิวคลีโอไทด์ 4 มิลลิลิตรผ่านคอลัมน์การกำจัดเกลือ
2. ล้างคอลัมน์ 2 ครั้งด้วยสารละลายล้าง 2 มล. เพื่อกำจัดลำดับที่ไม่สำเร็จ
3. ล้างคอลัมน์ 2 ครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 2 มล. เพื่อขจัดเกลือ ;)
4. ล้างคอลัมน์ 2 ครั้งด้วยกรดไตรฟลูออโรอะซิติก 3% ปริมาณ 2 มล. เพื่อกำจัด DMT โดยชั้นการดูดซับจะเปลี่ยนเป็นสีส้มแดง
5. ล้างคอลัมน์ด้วยน้ำที่ผ่านการดีไอออนไนซ์ 2 มิลลิลิตร สองครั้ง เพื่อกำจัดกรดไตรฟลูออโรอะซิติกและเกลือที่เหลือ
6. ชะเอซิโตไนไตรล์ 20% ออกมา 2 มล. แล้วประกอบเข้าด้วยกัน
ขั้นตอนที่ 3
การเตรียมตัวอย่าง
เติม Nac 0.5 M ลงในตัวอย่างโอลิโคนิวคลีโอไทด์ในปริมาตร 10 มล.
การเปิดใช้งานคอลัมน์การแยกเกลือ
การกระตุ้น: ใช้อะซีโตไนไตรล์ 5 มิลลิลิตรเพื่อกระตุ้นคอลัมน์
การปรับสมดุล: คอลัมน์ได้รับการปรับสมดุลด้วย TEAA 0.1 ม. จำนวน 10 มล. (PH 7.0)
กระบวนการทำความสะอาด
1. สารละลายที่ประกอบด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์ปริมาณ 10 มิลลิลิตรถูกส่งผ่านคอลัมน์การกำจัดเกลือ
2. ล้างคอลัมน์สองครั้งด้วยสารละลายล้าง 5 มล. เพื่อกำจัดลำดับที่ไม่สำเร็จ
3. ล้างคอลัมน์สองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 5 มิลลิลิตรเพื่อขจัดเกลือ
4. ล้างคอลัมน์สองครั้งด้วยกรดไตรฟลูออโรอะซิติก 3% ปริมาณ 5 มล. เพื่อกำจัด DMT และสังเกตว่าชั้นการดูดซับจะเปลี่ยนเป็นสีส้มแดง
5. ล้างคอลัมน์สองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 5 มล. เพื่อกำจัดกรดไตรฟลูออโรอะซิติกและเกลือตกค้าง
6. สกัดอะซีโตไนไตรล์ 20% ออกมา 5 มิลลิลิตร แล้วเก็บรวบรวมไว้
ขั้นตอนที่ 4
การเตรียมตัวอย่าง
เติม Nacl 0.5 M ลงในตัวอย่างโอลิโคนิวคลีโอไทด์จนมีปริมาตร 0.5 มล.
การเปิดใช้งานเพลท 96 หลุม
การกระตุ้น: อะซีโตไนไตรล์ 0.5 มิลลิลิตรถูกส่งผ่านแต่ละหลุมของเพลต 96 หลุม
สมดุล: ปรับสมดุลแผ่น 96 หลุมด้วยสารละลาย TEAA 0.1 M ปริมาณ 0.5 มล. (pH 7.0)
ขั้นตอนการทำความสะอาด
1. ส่งสารละลายที่ประกอบด้วยโอลิโคนิวคลีโอไทด์ 0.5 มิลลิลิตรผ่านเพลต 96 หลุม
2. ล้างจาน 96 หลุม 2 ครั้งด้วยสารละลายล้าง 0.5 มล. เพื่อขจัดลำดับที่ไม่ดี
3. ล้างจาน 96 หลุม 2 ครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 0.5 มิลลิลิตร เพื่อขจัดเกลือ
4. ล้างแผ่น 96 หลุม 2 ครั้งด้วยกรดไตรฟลูออโรอะซิติก 3% 0.5 มล. เพื่อกำจัด DMT และสังเกตว่าชั้นการดูดซับจะเปลี่ยนเป็นสีส้มแดง
5. ล้างแผ่น 96 หลุมสองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 0.5 มิลลิลิตร เพื่อขจัดกรดไตรฟลูออโรอะซิติกและเกลือที่เหลือ
6. ชะเอซีโตไนไตรล์ 20% ออกมา 0.5 มล. แล้วเก็บรวบรวมวัสดุ
ขั้นตอนที่ 5
การเตรียมตัวอย่าง
เติม Nacl 0.5 M ลงในตัวอย่างโอลิโคนิวคลีโอไทด์ในปริมาตร 1.2/2 มล.
การเปิดใช้งานเพลท 96 หลุม
การกระตุ้น: ข้าม 1-4 มล. 0.5 มล. ของอะซีโตไนไตรล์ผ่านแต่ละหลุมของเพลต 96 หลุม
การปรับสมดุล: ปรับสมดุลแผ่น 96 หลุมด้วยสารละลาย TEAA 0.1 M ปริมาณ 1-4 มล. ปริมาณ 0.5 มล. (PH 7.0)
กระบวนการทำความสะอาด
1. ส่งสารละลายที่ประกอบด้วยโอลิโคนิวคลีโอไทด์ 0.5-2 มิลลิลิตรผ่านเพลต 96 หลุม
2. ล้างจาน 96 หลุม 2 ครั้งด้วยสารละลายล้าง 1/2 มล. เพื่อขจัดลำดับที่ไม่พึงประสงค์ ;)
3. ล้างจาน 96 หลุมสองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1/2 มิลลิลิตร เพื่อขจัดเกลือ
4. ล้างแผ่น 96 หลุมด้วยกรดไตรฟลูออโรอะซิติก 3% 1/2 มล. 2 ครั้ง เพื่อกำจัด DMT และสังเกตว่าชั้นการดูดซับจะเปลี่ยนเป็นสีส้มแดง
5. ล้างจาน 96 หลุมด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1/2 มิลลิลิตร 2 ครั้ง เพื่อขจัดกรดไตรฟลูออโรอะซิติกและเกลือที่เหลือ
6. ชะเอซีโตไนไตรล์ 20% ออกมา 1/2 มิลลิลิตร แล้วเก็บรวบรวมวัสดุ
ขั้นตอนที่ 6
สารเคมี
เกรดโครมาโตกราฟีอะซีโตไนไตรล์
0.05 M ชา, PH 7.0
ชา 2 M, PH 7.0
น้ำดีไอออนไนซ์ (สำหรับการแยกเกลือและการทำให้บริสุทธิ์ของโมเลกุล RNA โดยไม่ใช้ RNase) อะซีโตไนไตรล์ 60% (ละลายในน้ำที่มี NH4OH 0.5%)
อะซีโตไนไตรล์ 20% (เพื่อขจัดเกลือออกจากโมเลกุล DNA หรือ RNA หลังจากการป้องกัน)
บัฟเฟอร์ TE: 10 มิลลิโมลต่อลิตร ทริส-คลา, 1 มิลลิโมลต่อลิตร EDTA, PH 8.0
การเตรียมตัวอย่าง
โอลิโกที่บริสุทธิ์ด้วย HPLC: เติม TEAA 0.1 M ในปริมาณที่เหมาะสมลงในโอลิโกที่บริสุทธิ์ด้วย HPLC เพื่อให้ความเข้มข้นของอะซีโตไนไตรล์สุดท้ายอยู่ที่ ≤5% โอลิโกที่บริสุทธิ์: ละลายชิ้นส่วนเจลที่มีโอลิโกนิวคลีโอไทด์ใน TEAA 0.05 M นำชิ้นส่วนเจลออก ละลายโอลิโกใน TEAA 0.1 M อย่างน้อย 2 มล.
โอลิโกละลายใน NH4OH หรือ AMA: ระเหยจนแห้งและละลายใน TEAA 0.1 M ปริมาตร 2 มล.
การเปิดใช้งานปั๊มการกำจัดเกลือ
การกระตุ้น: ใช้อะซีโตไนไตรล์ 1 มิลลิลิตรเพื่อกระตุ้นคอลัมน์
การปรับสมดุล: ปรับสมดุลคอลัมน์ TEAA ขนาด 1 มล. 2 M (pH 7.0)
ขั้นตอนการแยกเกลือออกจากโอลิโกสสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ด้วย HPLC
1. ส่งสารละลายที่มีโอลิโคนิวคลีโอไทด์ผ่านคอลัมน์การกำจัดเกลือ
2. ล้างคอลัมน์การกำจัดเกลือสองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1 มิลลิลิตรเพื่อขจัดเกลือออก
3. ชะผ่านคอลัมน์อะซีโตไนไตรล์ 60% ปริมาตร 1 มล. แล้วเก็บรวบรวม
ขั้นตอนการกำจัดเกลือโอลิโกสโดยวิธี PAAG
1. ส่งสารละลายที่มีโอลิโคนิวคลีโอไทด์ผ่านคอลัมน์การกำจัดเกลือ
2. ล้างคอลัมน์การกำจัดเกลือสองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1 มิลลิลิตรเพื่อขจัดเกลือออก
3. ชะผ่านคอลัมน์อะซีโตไนไตรล์ 60% ปริมาตร 1 มล. แล้วเก็บรวบรวม
ขั้นตอนการกำจัดเกลือออกจากโอลิกอน DNA หลังจากการสังเคราะห์
1. ส่งสารละลายที่มีโอลิโคนิวคลีโอไทด์ผ่านคอลัมน์การแยกเกลือออก แล้ว
2. ล้างคอลัมน์ TEAA ขนาด 1 มล. 0.1M สองครั้งเพื่อกำจัดลำดับที่ไม่สำเร็จ
3. ล้างคอลัมน์การกำจัดเกลือสองครั้งด้วยน้ำดีไอออนไนซ์ 1 มล. เพื่อกำจัดเกลือ
4. ส่งคอลัมน์ผ่านอะซีโตไนไตรล์ 20% 1 มล. แล้วประกอบเข้าด้วยกัน
ขั้นตอนการกำจัดเกลือของโอลิโกอาร์เอ็นเอหลังจากการสังเคราะห์
1. ส่งสารละลายที่มีโอลิโคนิวคลีโอไทด์ผ่านคอลัมน์การกำจัดเกลือ
2. ล้างคอลัมน์ด้วย TEAA 0.1 M ปริมาตร 2 มล.
3. ล้างคอลัมน์ด้วยน้ำปราศจาก RNase 2 มล.
4. ส่งอะซีโตไนไตรล์ 20% (น้ำปราศจาก RNase) จำนวน 2 มล. ผ่านคอลัมน์ ชะออก และเก็บรวบรวม การเก็บโอลิโกนิวคลีโอไทด์
โอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่ละลายในอะซีโตไนไตรล์ 20% และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4°C ป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์และเหมาะสำหรับการจัดเก็บในระยะสั้น
โอลิโกนิวคลีโอไทด์ในสารละลายอะซีโตไนไตรล์ 20% (หรือละลายในบัฟเฟอร์ที่มีฤทธิ์ด่างเช่น TE) สามารถเก็บไว้ได้นานที่อุณหภูมิต่ำถึง -20 °C
โอลิโกนิวคลีโอไทด์ในรูปแบบผงแช่แข็งสามารถเก็บไว้ได้เป็นเวลานาน
คำเตือน
ปริมาณของสารเคมีที่ใช้เป็นเพียงคำแนะนำเท่านั้นและควรปรับให้เหมาะสมในแต่ละกรณี
ปริมาณของสารเคมีที่ใช้เป็นเพียงคำแนะนำเท่านั้น และควรปรับให้เหมาะสมตามกรณีเป็นรายกรณี
คอลัมน์การแยกเกลือออกจากน้ำต้องผ่านสภาวะสมดุลการกระตุ้นที่เพียงพอเพื่อชะล้างสารตกค้างบนคอลัมน์/แผ่น และปรับปรุงความสามารถในการจับของคอลัมน์/แผ่นการแยกเกลือออกจากน้ำ การสุ่มตัวอย่างโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่สังเคราะห์ควรดำเนินการอย่างช้าๆ เพื่อป้องกันไม่ให้ผง CPG เข้าไปในคอลัมน์/แผ่นสำหรับการทำความสะอาดและการปนเปื้อนข้าม
คอลัมน์/เวเฟอร์การกำจัดเกลือ C18 ใช้เมทริกซ์ซิลิกา โดยช่วง PH ที่ใช้ได้คือ 2-7, PH > 7.5 ละลายเมทริกซ์ซิลิกาได้ง่าย, PH
เมื่อใช้ TFA เพื่อกำจัดเกลือออกจาก DMT ควรใส่ใจเวลา เพราะหากปล่อยไว้นานเกินไป อาจมีผลในการกำจัดพิวรีนออกไป
ติดตัวไว้
เทคโนโลยีการแยกเกลือและการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วของคอลัมน์สังเคราะห์ B&M Universal CPG Frits
คอลัมน์สังเคราะห์ B&M Universal CPG Frits เทคโนโลยีการแยกเกลือและการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็ว:
B&M Universal CPG Frits ผลิตจากโพลีเอทิลีนบริสุทธิ์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงพิเศษที่นำเข้าและผง CPG ที่นำเข้า ผ่านกระบวนการพิเศษ ทำให้มีประสิทธิภาพการสังเคราะห์ที่ดีในคอลัมน์สังเคราะห์ มีอัตราการกลายพันธุ์ต่ำ และมีคุณภาพผลิตภัณฑ์ที่เชื่อถือได้
หลังจากการสังเคราะห์เสร็จสิ้นในเครื่องสังเคราะห์ซีรีส์ Dr.Oligo/Mermade และแอมโมเนียถูกละลายแล้ว สามารถแยก Oligo ออกโดยตรงสู่คอลัมน์สังเคราะห์ และหลังจากการตวงและการระบายออกแล้ว สามารถใช้สำหรับปฏิกิริยา PCR ทั่วไปได้โดยตรงโดยไม่ต้องมีขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติม ซึ่งสะดวกในการใช้งาน ประหยัดต้นทุน และส่งมอบได้เร็วขึ้น!
ขั้นตอนการดำเนินการที่เฉพาะเจาะจงมีดังนี้:
1. การสังเคราะห์ B&M Universal CPG Frits คอลัมน์/แผ่นสังเคราะห์/วินาที 400ul ส่วนผสมน้ำบริสุทธิ์พิเศษอะซีโตไนไตรล์ 75% ล้าง 2 ครั้งเพื่อกำจัดรีเอเจนต์สังเคราะห์ที่เหลือ
2 คอลัมน์/แผ่นสลายแอมโมเนียสังเคราะห์ B&M Universal CPG Frits, 90°C, 80PSI, สลายแอมโมเนีย 2-2.5 ชั่วโมง;
3, คอลัมน์/แผ่นสังเคราะห์ล้างอะซีโตไนไตรล์ 100% 400L สองครั้ง
4、ส่วนผสมน้ำบริสุทธิ์พิเศษอะเซโทไนไตรล์ 90% 400ul คอลัมน์/แผ่นซักสังเคราะห์ 2 ครั้ง ปั๊มแห้ง
5、ปริมาตรของสารละลายที่เหมาะสมสำหรับการชะไพรเมอร์บนคอลัมน์/แผ่นสังเคราะห์ สารละลายอาจเป็นน้ำบริสุทธิ์สูง อาจเป็นส่วนผสมของน้ำบริสุทธิ์สูงไตรเอทิลามีน 3% หรืออาจเป็นส่วนผสมของน้ำบริสุทธิ์สูงอะซีโตไนไตรล์ประมาณ 20% ก็ได้
6、สามารถวัด จ่าย ระบาย บรรจุ และจัดส่งสารละลายชะล้างได้